多吉美临床前动物药代动力学研究

简介

在Wistar大鼠，CD－1小鼠和比格犬，体内试验考察了Sorafenib（BAY43－9006）以甲苯磺酸盐形式（BAY54－9085）给药的药代动力学。另外，在包括人在内的各物种，体外试验评价了本品与血浆蛋白的结合，以及本品在血细胞/血浆中的分布和代谢。

在大鼠和小鼠，[¹⁴C]标记的Sorafenib以及/或其放射活性代谢产物几乎完全吸收，在犬为部分吸收（68%）。原药的绝对生物利用度为中到高度（在犬为60%，在大鼠和小鼠为80%）。在大鼠（0.044L/[kg.h]）的血浆消除率明显低于小鼠和犬（0.13－0.15L/[kg.h]）。在大鼠，小鼠和犬Vss数值适中，约为0.7L/kg。血浆中原药的消除半衰期与给药途径无关；在大鼠约为9小时，小鼠为6小时，犬为4小时。

Sorafenib与蛋白高度结合且与物种有关，几乎在所有器官和组织中，放射活性的分布迅速而均匀，穿越血/脑屏障的能力为低到中度。在大鼠的器官和组织，放射活性未见任何不可逆或持久性结合。[¹⁴C]标记的Sorafenib和/或其放射标记的代谢产物穿过胎盘屏障的能力为中度，而且明显分泌到哺乳期大鼠的乳汁中。

Sorafenib并未对主要的CYP异构体产生诱导作用。在体外发现Sorafenib对CYP异构体（如CYP2B6，2C8和2C9）以及UDP－葡糖醛酸转移酶UGT1A1和1A9具有抑制作用。比较各动物物种在体外肝微粒体培养试验的结果发现：在人，猴和小鼠，N－氧化反应（M－2）最为突出，而在大鼠和犬，居优势地位的是经N－甲基羟基化作用生成M－3。在人体内，CYP3A4是催化Sorafenib的代谢途径I（氧化代谢）的关键酶。除代谢途径I之外，在人体肝细胞内尚能形成Sorafenib葡糖苷酸（M－7）。Sorafenib的葡糖苷酸化经由UDP－葡糖醛酸转移酶（UGT）1A9催化。

口服给药后，原药是大鼠，犬和人血浆中的主要组分。在大鼠和犬的血浆中，M－3（BAY72－1973）是主要代谢产物，但在人血浆中，M－2居优势地位。在人体血浆中，放射活性总量和Sorafenib进入肝肠循环。在人和大鼠，Sorafenib是粪便提取物中的主要组分。羧酸化M－6是大鼠，犬和人体内主要的代谢产物。比较Sorafenib在人体和动物体内的生物转化发现，两条代谢途径在体外和体内存在显著差异。在人体外和体内试验中，吡啶的N－氧化作用（M－2，BAY67－3472）明显优于甲基羟基化作用（M－3，BAY72－1973）。葡糖苷酸化反应仅在人体内Sorafenib的生物转化中占有重要地位。

与大鼠和犬相比，在人体内经肾脏排泄的放射活性更为显著，这是因为经尿排泄的Sorafenib葡糖苷酸M－7的生成与物种有关。在大鼠和犬，放射活性主要经胆管/排泄物排泄；经尿排泄量较低。在大鼠，给药后72小时内放射活性几乎完全消除。

分析方法

在放射标记的Sorafenib进行的试验中，[¹⁴C]BAY43-9006及其甲苯磺酸盐[¹⁴C]BAY54－9085的2－吡啶酰胺基团以[¹⁴C]标记⁽⁵⁰⁾。在药代动力学试验中，使用液体闪烁计数法（LSC）分析了血样中与受试物质有关的放射活性总量；使用联有无线检测或紫外检测器的高效液相色谱仪（HPLC）检测原药及其代谢产物水平。使用液体闪烁计数仪（LSC）分析尿样和粪便样品中的放射活性

试验研究了几种经验证的LC－MS/MS分析方法，用于检测不同物种血浆中Sorafenib（BAY 43-9006）及其代谢产物BAY72－1974 (M-1), BAY 67-3472 (M-2),BAY72－1973（M－3），BAY 43-9007 (M-4)和BAY 68-7769 (M-5)⁽⁵¹⁾。检测Sorafenib的不同方法的定量限（LOQ）介于0.5－10µg/L之间，精密度<15%，准确度范围在93%和114%之间。动物血浆中的Sorafenib在 -70^oC下贮存至少3个月仍然稳定。

吸收和血药浓度

除在移植了人Colo－205结肠癌的裸鼠⁽⁴⁰⁾给药剂量为30mg/kg外，在CD－1小鼠⁽⁵²⁾，Wistar大鼠⁽⁵³⁾和比格犬⁽⁵⁴⁾，考察在3.5－4.1mg/kg剂量下，Sorafenib（以Sorafenib甲苯磺酸盐BAY 54－9085形式给药）的吸收和基本药代动力学。在多数试验中本品为口服给药，因为在临床试验中给药途径为口服，仅在生物利用度试验中为静注（IV）给药。

单剂量给药后的药代动力学

在CD－1小鼠和Wistar大鼠，Sorafenib几乎为完全吸收，但在比格犬仅部分吸收。在三种动物进行的评价试验中，口服药物后1.5－2h之间的最大血药浓度显示放射活性（[¹⁴C]标记的Sorafenib甲苯磺酸盐和代谢产物）的吸收速度为中速。在犬的生物利用度为59%，在大鼠和小鼠约为80%。口服给药后，Sorafenib原药在小鼠的终末端消除半衰期为6h，在大鼠为9h，犬为4h。大鼠血浆中总消除率（0.044L/[h·kg]）明显低于小鼠（0.15L/[h·kg]）或犬（0.13L/[h·kg]）。Vss数值在三种动物十分相似（范围在0.65L/kg－0.74L/kg）。

在患有肿瘤的NCr－裸鼠，本品在血浆和肿瘤组织中的暴露量，即AUC和Cmax在第一天和第四天相似。在这两天，肿瘤中的暴露量比血浆高出约两倍。

与血浆蛋白结合以及在血液中的分布

体外试验分析了Sorafenib在稀释血浆和固体支撑液膜（Trans il®）内的分布，研究了Sorafenib与小鼠，大鼠，兔，犬和人血浆蛋白的结合⁽⁵⁵⁾。Sorafenib与血浆蛋白高度结合且与物种有关。在人，大鼠和小鼠血浆中，未结合部分约为0.5%，在犬为0.89%，兔为2%。在大鼠，犬和人的血液中，Sorafenib在血浆和血细胞中的分布大致相等。

Sorafenib可与各种血浆蛋白高度结合。主要的结合蛋白有人血清白蛋白， α－β－球蛋白和低密度脂蛋白（LDL），未结合部分在1.02%－3.55%之间。α－酸性糖蛋白和γ球蛋白在血浆蛋白结合中并不十分明显。在人和大鼠血浆中，本品与血浆蛋白的结合完全可逆。

其他与蛋白高度结合的药物，如速尿，华法令，硝苯地平，洋地黄毒苷，心得安，布洛芬，水杨酸，紫杉醇，多烯紫杉醇，顺铂和吉非替尼在治疗浓度下并未取代Sorafenib与人血浆蛋白的结合位点⁽⁵⁶⁾。

整体放射性自显影技术

在雄性和雌性Wistar大鼠以及雄性有色Long Evans大鼠，通过整体放射性自显影技术对分布方式进行了定性⁽⁵⁷⁾和定量⁽⁵⁸⁾分析。除了大脑，精囊和成骨，放射性同位素标记的Sorafenib和/或其代谢产物在体内分布均匀。分布方式与给药途径和性别无关。在多数器官和组织，给药后4h达到最大浓度。穿越血/脑屏障的能力为低到中度。总之，在器官和组织中未见任何不可逆的，持久性放射活性数据。

胎盘转运

在大鼠，Sorafenib和/或其代谢产物穿越胎盘屏障的能力为中度⁽⁵⁹⁾。在胎儿的平均暴露量达到母体血液中的52%。Sorafenib在胎儿的多数组织和器官内均匀分布，但是在胎儿任一组织或器官，Cmax和AUC_(0－24h)暴露量均未超过母体血液中的相应数值。同样，在胎儿器官中的暴露量通常低于母体相应器官内的浓度，唯一的例外是在胎儿大脑，暴露量比母体大脑高2.3倍。24小时后在怀孕的大鼠检测到给药剂量的54.4%，主要存在于母体，胎儿仅有1.8%。

在乳汁的分泌

在哺乳期大鼠，32小时内乳汁中的回收量为给药剂量的27.3%⁽⁶⁰⁾。在乳汁中放射活性AUC高于母体血浆，乳汁与血浆之比为4.9。